血培养标本采集最佳时间应在抗菌药物使用前。在寒颤和发热初起前30分钟至1小时内进行血培养检查，以获得尽可能多的病原菌。只要符合血培养检查采血指征的患儿，怀疑患有菌血症或真菌血症的，应该在怀疑症状出现前立即采集血培养标本。对于已应用抗生素的患儿，应在寒战和发热前0.5-1小时采集血液标本，此时细菌大量入血。在临床实践中，很难准确掌握最佳采集时间。一般可计算在寒战或发热高峰后尽快从不同部位采集两套血培养。通常要求在10分钟内完成。多项研究表明，血培养阳性率约为65%，两瓶血培养阳性率大于80%，三瓶血培养阳性率大于95%，临床上一般采集两套血培养。